1、概念：

熒光原位雜交（Fluorescence in situ Hybridization，簡(jiǎn)稱(chēng)FISH）是一種基于核酸雜交原理的分子生物學(xué)技術(shù)，主要用于在細胞或組織中定位和檢測特定的DNA或RNA序列。它使用熒光標記的探針，這些探針是與目標序列互補的核酸片段，通過(guò)雜交反應與目標序列結合，然后通過(guò)熒光顯微鏡觀(guān)察和定位。

2、  實(shí)驗設備：FISH實(shí)驗需要的設備包括顯微鏡（最好是熒光顯微鏡）、恒溫水浴或雜交爐（用于探針的雜交）、離心機（用于樣品的處理和洗滌）、冷凍切片機（如果處理組織樣品）等。此外，還需要各種實(shí)驗耗材，如滑片、蓋片、熒光標記的探針等。

3、實(shí)驗步驟：

樣品制備：首先，需要將細胞或組織樣品制備到滑片上，并進(jìn)行固定。如果是細胞樣品，通?？梢灾苯油磕ǖ交?；如果是組織樣品，可能需要進(jìn)行切片。固定的目的是保持細胞或組織的結構，并防止DNA或RNA的降解。

 DNA或RNA的變性：然后，需要通過(guò)加熱或使用化學(xué)試劑將樣品中的DNA或RNA變性，使其從雙鏈狀態(tài)變?yōu)閱捂湢顟B(tài)，以便探針可以與其雜交。

探針雜交：接下來(lái)，將熒光標記的探針加入到樣品中，讓它與目標DNA或RNA序列進(jìn)行雜交。這通常在恒溫條件下進(jìn)行，需要一定的時(shí)間。

 洗滌：雜交后，需要通過(guò)洗滌去除未結合的或非特異性結合的探針。

熒光顯微鏡觀(guān)察和圖像分析：最后，使用熒光顯微鏡觀(guān)察樣品，檢測和定位熒光信號。然后進(jìn)行圖像分析，根據熒光信號的位置和強度，得出目標DNA或RNA序列在細胞或組織中的分布和表達水平。

4、  常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法：

 非特異性結合：如果探針與非目標序列發(fā)生結合，可能會(huì )產(chǎn)生假陽(yáng)性的結果。這可以通過(guò)優(yōu)化雜交條件（如溫度、時(shí)間、探針濃度等）和使用更特異性的探針來(lái)減少。

信號強度低：信號強度低可能導致目標序列的檢測不準確。這可能是因為探針的質(zhì)量不好、探針的濃度不足、雜交條件不理想等原因?？梢酝ㄟ^(guò)提高探針的質(zhì)量和濃度、優(yōu)化雜交條件、使用信號放大技術(shù)等方法來(lái)提高信號強度。

背景高：背景高可能使得真正的信號難以區分。這可能是由于非特異性結合、滑片的污染、熒光顯微鏡的設置不當等原因?？梢酝ㄟ^(guò)減少非特異性結合、提高滑片的清潔度、優(yōu)化顯微鏡的設置等方法來(lái)降低背景。

文章出自：熒光原位雜交實(shí)驗（FISH）    想了解更多請關(guān)注：http://www.shiyi86.com/