實(shí)驗步驟：

1.組織脫水：梯度酒精對組織進(jìn)行脫水處理，75%酒精（4h）-85%酒精(2h)-90%酒精  (1.5h)-95%酒精（1h）-無(wú)水乙醇I（0.5h）-無(wú)水乙醇Ⅱ（0.5h ）；

2. 組織透明：組織塊經(jīng)酒精脫水后必須經(jīng)過(guò)透明。透明劑（二甲苯）能同時(shí)與脫水劑和石蠟混合，它取代了脫水劑后，石蠟便能順利地滲入組織，無(wú)水乙醇：二甲苯（1：1）（10min）-二甲苯Ⅰ（10min）-二甲苯Ⅱ（10min）；

3.浸蠟：透明后的組織塊依次經(jīng)3缸石蠟（60℃）進(jìn)行浸蠟，石蠟Ⅰ（60℃）（1h）-石蠟Ⅱ（60℃）（1h ）-石蠟Ⅲ（60℃）（1h）；

以上3個(gè)實(shí)驗步驟都在生物組織脫水機里面完成（機器自動(dòng)程序）。

4.包埋：包埋是使浸透蠟的組織塊包裹在石蠟塊中。包埋用蠟的溫度應略高于浸蠟溫度，保證組織塊與包埋石蠟完全融為一體。

5.切片和烤片 ：包埋好的蠟塊使用徠卡病理切片機進(jìn)行切片，切好的組織片放入40℃的水浴鍋中進(jìn)行攤片，防脫玻片傾斜著(zhù)插入水面去撈取切片，使切片貼附在載玻片的合適位置，于60℃ 烤箱烤片3個(gè)小時(shí)即可。

6.切片脫蠟：將石蠟切片依次放入二甲苯Ⅰ（20min）-二甲苯Ⅱ（20min）-二甲苯Ⅲ（20min）-無(wú)水乙醇Ⅰ（5min）-無(wú)水乙醇Ⅱ（5min）-95%酒精（5min）-90%酒精（5min）-80%酒精（5min）-70%酒精（5min），然后蒸餾水浸洗5min，DEPC水浸泡。

7.切片于修復液中煮沸10-15分鐘，自然冷卻。滴加蛋白酶K(20ug/ml) 37°消化5min。純水沖洗后PBS洗3次×5min。

8.滴加預雜交液，37°C孵育1h。

9.傾去預雜交液，滴加含探針雜交液,65℃恒溫箱度雜交過(guò)夜。

10.2×SSC，37°C 洗10min，1×SSC，37°C洗5min洗2次，0.5×SSC室溫洗10min。

11.DAPI避光復染5min，清洗后用抗熒光淬滅劑封片；

12.熒光顯微鏡下觀(guān)察。

文章出自：原位雜交實(shí)驗    想了解更多請關(guān)注：http://www.shiyi86.com/