①原理

高爾基染色包括銀 Golgi 染色和汞 Golgi 染色技術(shù)。

銀 Golgi 染色原理:

浸泡腦組織的重鉻酸鉀溶液與硝酸銀溶液發(fā)生反應，生成黑色的鉻酸銀沉淀，由于組織的嗜銀性而沉積于神經(jīng)細胞中。銀高爾基技術(shù)主要有兩種被廣泛應用:快速 Golgi 法和 Golgi- Kopsch 法。

汞 Golgi 染色原理:

由于銀 Golgi染色存在一定缺陷，Cox 對高爾基技術(shù)進(jìn)行改進(jìn)，被稱(chēng)為「Golgi-Cox 法」。使用重鉻酸鉀和氣化汞的混合物，并加入鉻酸鉀來(lái)調節溶液酸性的反應。Golgi-Cox 染色的化學(xué)性質(zhì)尚未完全了解;Golgi-Cox 浸漬的神經(jīng)細胞在堿化作用下形成的黑色沉積物被認為是黑色硫化汞和一些金屬的復雜氧化物。

②用途

高爾基法能夠發(fā)現動(dòng)物大腦的神經(jīng)細胞因藥物處理或神經(jīng)系統疾病引起的樹(shù)突和樹(shù)突棘微小形態(tài)改變，觀(guān)察神經(jīng)發(fā)育，死亡，傳遞等方面區別。如阿爾茨海默病檢測腦組織神經(jīng)細胞形態(tài)改變記憶學(xué)習記憶的影響。

尼氏染色法(Nissl staining):

優(yōu)點(diǎn):

操作簡(jiǎn)便，實(shí)驗成本低;

不足:

中腦對神經(jīng)元進(jìn)行數量統計，觀(guān)察是否有神經(jīng)元丟失。不能觀(guān)察樹(shù)突或樹(shù)突棘的變化。

③材料與儀器

儀器:

3D 掃描儀掃描或正置顯微鏡(含拍照系統)

材料:

動(dòng)物及死后人類(lèi)腦組織

4%(w/v) 多聚甲醛、異戊烷、干冰

丙烯基紫羅蘭溶液

50%/75%/95%/100% 乙醇、二甲苯封片劑、刀片、染色缸、低溫保持器凝膠涂層顯微鏡載玻片、吸管、濾紙

蓋玻片、FD 快速高爾基染色試劑盒

④步驟

本次實(shí)驗步驟以?xún)?yōu)化的 Golgi-cox 技術(shù)為例:

1.提前24h將試劑盒中的溶液A和B混勻:

2.將小鼠腦組織取出后用干凈的PBS沖洗后，置于A(yíng)和B的混合液中，在室溫下避光保存。浸泡6h以后或次日更換新的浸漬液，在室溫下避光保存2周(每個(gè)腦組織至少用2mL浸泡液):

⑤注意事項

1.本實(shí)驗樣品使用新鮮或短期固定的腦組織。不推薦使用已經(jīng)進(jìn)行福爾馬林固定或新鮮冷凍的腦組織;

2.對于體積較大的腦部樣本(如大鼠腦組織)需用鋒利的刀片切成大約 10mm厚的塊狀;

3.溶液A和溶液B的混合液至少提前 24h配制且不能攪拌:

4.步驟2中，在腦組織浸泡期間每周兩次對裝有組織的容器可輕輕地左右旋渦(一定不要晃動(dòng)!)幾秒鐘:

5.溶液A和B含有重金屬,接觸皮膚是有毒的，如果吞咽可能是致命的。實(shí)驗操作時(shí)，一定要穿戴防護服、手套等防護用具，在化學(xué)通風(fēng)櫥中完成。溶液A和B的廢棄物要專(zhuān)門(mén)收集起來(lái)，統一由專(zhuān)業(yè)部門(mén)處置;

6.用 Golgi 染色的切片應避光保存

⑥常見(jiàn)問(wèn)題

1. 背景顏色深:

可能原因是溶液A和B沒(méi)有提前24h配置或腦組織在A(yíng)和B混合液中浸泡時(shí)間過(guò)長(cháng)，超過(guò) 14天。

2.出現陰性結果:

可能是因為將動(dòng)物進(jìn)行灌注后再取腦進(jìn)行實(shí)驗。

3.高爾基染色不深:

可能原因腦組織在A(yíng)和B混合液中染色時(shí)間完全不足14 天或是因為液體太少沒(méi)有完全浸潤腦組織或是試劑過(guò)期。

文章出自：高爾基染色實(shí)驗    想了解更多請關(guān)注：http://www.shiyi86.com/