染色原理

抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate-resistant acid phosphatase，TRAP) 是破骨細胞的特異性標志酶，酒石酸鹽抵抗的酸性磷酸酶在酒石酸環(huán)境中,水解荼酚磷酸鹽,產(chǎn)生的 a-蔡酚與重氮副品紅偶聯(lián)形成不溶性的紫紅色沉淀。骨組織中的破骨細胞分泌酒石酸鹽抵抗的酸性磷酸酶,用此方法可顯示骨組織中破骨細胞的活性.此方法適用于骨組織的石蠟切片,冰凍切片及培養的破骨細胞。

染色步驟

1.37℃預熱足夠的去離子水，Fixation solution(固定液)室溫放置，細胞爬片浸沒(méi)30秒，用去離子水徹底清洗，不要讓爬片太干燥；

2.PBS洗一次，吸棄時(shí)注意易將細胞吸掉；

3.準備兩個(gè)1.5mLep管，各加Fastgarnet GBCBasesolution(快速石榴石型堿溶液)和Sodium Nitrite Solution(亞硝酸鹽溶液)，輕輕沉勻30秒，室溫靜置2分鐘。兩者混合后為步驟三混勻的溶液；

4.另標簽一個(gè)管為A(B)，并按以下要求配置混合液:(個(gè)人意見(jiàn):明書(shū)的B不用做只是對照)混勻的溶液Naphthol AS-BI Phosphate Solution（蔡酚AS-BI 磷酸溶液) Acelate Solution (酷酸鹽溶液)37℃預熱的去離子水 Tartrate Solution《酒石酸鹽溶液)(個(gè)人意見(jiàn):最后加活石酸鹽溶液避光)；

5.把步4中的配置的染色液倒入合適的染色缸中(個(gè)人意見(jiàn):直接在35mm 皿上放置可拆卸96微孔板染，然后避光(錫箱紙包裹后放置于一次性手套)水浴)，水浴加熱到37℃，再加玻片前一定要保證溫度達到 37℃；

6.把爬片放入染色缸中，37℃避光孵育1小時(shí)；

7.孵育1小時(shí)后，用去離子水徹底清洗爬片；

8.在HematoxylinGll NO.3(蘇木精洛液)復染2分鐘；

9.堿性自來(lái)水沖洗兒分鐘，直到出現藍色的核；

10.自然晾干，甘油明膠封片，顯微鏡觀(guān)察。

染色結果

破骨細胞細胞漿呈紫紅色胞核藍色。

注意事項

骨組織易脫片，操作過(guò)程水洗要輕。

文章出自：Trap染色實(shí)驗    想了解更多請關(guān)注：http://www.shiyi86.com/