一、油紅O染色實(shí)驗準備

1、儀器耗材：生物組織攤烤片機、3DHISTECH掃描儀、顯微鏡、蓋玻片、載玻片

2、染色試劑：普拉特澤改良油紅O染色液、甘油明膠、無(wú)水乙醇、二甲苯

3、待測組織的冰凍切片

二、油紅O染色實(shí)驗步驟

1、冰凍切片厚度6～10 μm，不固定或10%福爾馬林固定10 min后水洗。

2、切片入蒸餾水中稍沖洗。

3、切片入70%的乙醇內浸洗20～30 s。

4、切片入改良油紅O染色液中(加蓋)，密閉染色10～15 min。

5、分色：入70%的乙醇內稍洗以便去除染液。

6、入蒸餾水中稍微清洗。

7、蘇木素染色液復染核1～2 min。

8、(可選)1%的鹽酸溶液稍微分化一下。

9、(可選)自來(lái)水漂洗10 min或稀碳酸鋰溶液中促藍。

10、入蒸餾水中稍微清洗。

11、用濾紙吸干周?chē)帧?/span>

12、甘油明膠或阿拉伯糖膠封固。

三、油紅O染色注意事項

1、石蠟切片不能用于油紅O染色，原因在于石蠟包埋過(guò)程中需要脫水，脫水過(guò)程中需要乙醇-二甲苯和石蠟，二甲苯是有機溶劑，會(huì )把中性脂肪溶解；

2、 冰凍切片準備時(shí)，包埋的降溫過(guò)程建議選擇干冰，原因在于若選擇液氮降溫過(guò)程較強烈，可能導致組織內部炸裂，而干冰降溫的過(guò)程比較緩和，染出來(lái)的片子比較好看；

3、切片的厚度要稍微厚一些，建議選擇8-10 μm；

4、實(shí)驗設計建議設計陰性對照和陽(yáng)性對照，如陽(yáng)性對照可以用脂質(zhì)豐富的肝臟組織等，陰性對照可以根據文獻來(lái)選擇無(wú)脂肪沉積的組織。

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