一、免疫組織化學(xué)技術(shù)的基本原理

應用免疫學(xué)和組織化學(xué)原理，對組織切片或細胞標本中的某些化學(xué)成分進(jìn)行原位定性、定位或定量研究，稱(chēng)為免疫組織化學(xué)或免疫細胞化學(xué)。

眾所周知，抗體與抗原的結合具有高度的特異性。免疫組織化學(xué)就是利用這一特性，即先提取組織或細胞中的一些化學(xué)物質(zhì)，然后作為抗原或半抗原免疫小鼠等實(shí)驗動(dòng)物，制備特異性抗體。然后將此抗體(第一抗體)作為抗原免疫動(dòng)物制備第二抗體，用某種酶(常用的辣根過(guò)氧化物酶)或生物素處理，再與前述抗原成分結合，擴增抗原。由于抗體與抗原結合形成的免疫復合物是無(wú)色的，所以需要借助組織化學(xué)方法顯示抗原與抗體的反應部位(常見(jiàn)的顯色劑DAB顯示為棕黃色顆粒)。

通過(guò)抗原抗體反應和顯色反應，可以顯示細胞或組織內的化學(xué)成分，在顯微鏡下可以清楚地看到細胞內抗原抗體反應的產(chǎn)物，從而可以原位確定某些化學(xué)成分在細胞或組織內的分布和含量?；蛘呓M織中任何可以作為抗原或半抗原的物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受體、酶、激素、核酸、病原體等，都可以通過(guò)相應的特異性抗體進(jìn)行檢測。

二、免疫組織化學(xué)染色法

1.根據標記物質(zhì)的種類(lèi)，如熒光染料、放射性同位素、酶(主要是辣根過(guò)氧化物酶和堿性磷酸酶)、鐵蛋白、膠體金等?？煞譃?a href="http://www.shiyi86.com/" target="_self">免疫熒光法、放射免疫法、酶標記法和免疫金銀法等。

2.按染色步驟可分為直接法(也稱(chēng)一步法)和間接法(二步法、三步法或多步法)；與直接法相比，間接法的靈敏度要高得多。

3.根據結合方法可分為抗原抗體結合法，如過(guò)氧化物酶-抗過(guò)氧化物酶(PAP)法和親和連接法，如卵清蛋白-生物素-過(guò)氧化物酶復合物(ABC)法和鏈霉菌親和素-過(guò)氧化物酶連接(SP)法，其中SP法是最常用的方法。

三、幾種常用免疫組織化學(xué)方法的原理

1.免疫熒光法

這是最早建立的免疫組織化學(xué)技術(shù)?；诳乖贵w特異性結合的原理，將已知的抗體用熒光素標記，作為探針檢查細胞或組織中相應的抗原，在熒光顯微鏡下觀(guān)察。當抗原抗體復合物中的熒光素受到激發(fā)光照射時(shí)，會(huì )發(fā)出一定波長(cháng)的熒光，從而可以確定抗原在組織中的位置，進(jìn)而進(jìn)行定量分析。免疫熒光技術(shù)因其特異性強、靈敏度高、快速簡(jiǎn)便而廣泛應用于臨床病理診斷和檢驗。

2.免疫酶標記法

免疫標記是20世紀60年代繼免疫熒光之后發(fā)展起來(lái)的一項技術(shù)?；驹硎窍葘⒚笜擞浀目贵w與組織或細胞反應，再加入酶的底物，生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒。通過(guò)光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡，定位細胞表面和細胞內部的各種抗原成分。免疫標記技術(shù)是目前最常用的技術(shù)。

和免疫熒光技術(shù)相比，該方法具有以下優(yōu)點(diǎn):定位準確，對比度好，染色標本可長(cháng)期保存，適用于光鏡和電鏡研究。

隨著(zhù)酶標記方法的快速發(fā)展，衍生出了多種標記方法。隨著(zhù)方法的不斷改進(jìn)和創(chuàng )新，其特異性和靈敏度也在不斷提高，使用也越來(lái)越方便。目前病理診斷中廣泛應用的有PAP法、ABC法和SP法。

3.免疫膠體金技術(shù)

膠體金技術(shù)使用膠體金，一種特殊的金屬顆粒，作為標記。金膠體是指金的水溶膠，能快速穩定地吸附蛋白質(zhì)，但對蛋白質(zhì)的生物活性無(wú)明顯影響。因此，利用膠體金標記的一抗、二抗或其他能特異性結合免疫球蛋白(如葡萄球菌蛋白A)的分子作為探針，可以對組織或細胞中的抗原進(jìn)行定性、局部甚至定量的研究。由于膠體金具有大小不一的顆粒，且膠體金的電子密度高，因此免疫膠體金技術(shù)特別適用于免疫電鏡的單標記或多標記定位研究。膠體金本身是淺到暗紅色的，所以也適合光學(xué)顯微鏡觀(guān)察。比如應用銀增強免疫金銀法則，用光學(xué)顯微鏡觀(guān)察更方便。

四、免疫組織化學(xué)技術(shù)的優(yōu)勢

1.特異性強。免疫學(xué)的基本原理決定了抗原和抗體的結合具有高度的特異性。所以從理論上講，免疫組化也是抗原在組織細胞中的特異性展示，比如角蛋白展示上皮成分，LCA展示淋巴細胞成分。只有當組織細胞中存在交叉抗原時(shí)，才會(huì )發(fā)生交叉反應。

2.高靈敏度在免疫組化應用的初期，由于技術(shù)的限制，只有直接法和間接法等低靈敏度的技術(shù)。這時(shí)候抗體只能稀釋幾倍或者幾十倍；現在由于A(yíng)BC法或SP法的出現，稀釋幾千、幾萬(wàn)甚至幾億倍的抗體仍能在組織細胞中與抗原結合。這種高度敏感的抗體-抗原反應使得免疫組織化學(xué)方法越來(lái)越方便地應用于常規病理診斷。

3.定位準確，形態(tài)與功能相結合。該技術(shù)可以通過(guò)抗原抗體反應和顯色反應在組織和細胞中準確定位抗原，使不同的抗原在同一組織或細胞中同時(shí)定位和觀(guān)察，從而研究形態(tài)和功能的結合，對病理學(xué)的進(jìn)一步研究具有重要意義。