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    免疫熒光

    服務(wù)介紹:
           用熒光抗體示蹤或檢查相應抗原的方法稱(chēng)熒光抗體法;用已知的熒光抗原標記物示蹤或檢查相應抗體的方法稱(chēng)熒光抗原法。這兩種方法總稱(chēng)免疫熒光技術(shù),因為熒光色素不但能與抗體球蛋白結合,用于檢測或定位各種抗原,也可以與其他蛋白質(zhì)結合,用于檢測或定位抗體,但是在實(shí)際工作中熒光抗原技術(shù)很少應用,所以人們習慣稱(chēng)為熒光抗體技術(shù),或稱(chēng)為免疫熒光技術(shù)。以熒光抗體方法較常用。用免疫熒光技術(shù)顯示和檢查細胞或組織內抗原或半抗原物質(zhì)等方法稱(chēng)為免疫熒光細胞(或組織)化學(xué)技術(shù)。

    該技術(shù)的主要特點(diǎn)是:特異性強、敏感性高、速度快。主要缺點(diǎn)是:非特異性染色問(wèn)題尚未完全解決,結果判定的客觀(guān)性不足,技術(shù)程序也還比較復雜。

    熒光免疫法按反應體系及定量方法不同,還可進(jìn)一步分做若干種。與放射免疫法相比,熒光免疫法無(wú)放射性污染,并且大多操作簡(jiǎn)便,便于推廣。國外生產(chǎn)的TDM用試劑盒,有相當一部分即屬于此類(lèi),并且還有專(zhuān)供TDM熒光偏振免疫分析用的自動(dòng)分析儀生產(chǎn)。

    技術(shù)原理:
           免疫學(xué)的基本反應是抗原-抗體反應。由于抗原抗體反應具有高度的特異性,所以當抗原抗體發(fā)生反應時(shí),只要知道其中的一個(gè)因素,就可以查出另一個(gè)因素。免疫熒光技術(shù)就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體(或抗原)上,與其相應的抗原(或抗體)結合后,在熒光顯微鏡下呈現一種特異性熒光反應。


    實(shí)驗步驟:

    實(shí)驗結果展示:


     
    常見(jiàn)問(wèn)題:

    無(wú)/弱染色?

    烤片溫度過(guò)高,推薦56℃-60℃1-2h;

    一抗是否適用固定液和石蠟切片,使用濃度是否過(guò)低,孵育是否時(shí)間過(guò)短等。

    非特異性背景染色?

    是否滅活內源性過(guò)氧化物酶;

    孵育過(guò)程中干片;

    抗原熱修復過(guò)度。

    染色過(guò)深?

    一抗濃度過(guò)高;

    染色試濃度過(guò)高或孵育時(shí)間過(guò)長(cháng);

    染色劑濃度過(guò)高或孵育時(shí)間過(guò)長(cháng)


    送樣運輸要求:

    1、冰凍切片-20℃保存和運輸;

    2、石蠟切片常溫運輸至實(shí)驗室;

    3、細胞爬片用固定液浸泡,4℃保存和運輸。

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